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总胆固醇检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。

血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在500～520nm处进行比色测定。

• 生理盐水或PBS
  
• 离心管、小试管或96孔板、水浴锅或恒温箱、分光光度计或酶标仪、全自动或半自动生化分析仪

• 样本处理：
  
  • 血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
    
  • 细胞样本：
    
    • 取适量的细胞(一般推荐>10⁶以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
      
    • 用PBS或生理盐水清洗1～2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。
      
    • 加入200～300μL的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3～5次，亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用1～2% Triton X-100冰浴30～60min，制备好的裂解液不可离心。
  • 组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)∶生理盐水或PBS(ml)＝1∶9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500～3000g离心10min，取上清。
• TC测定：
  
  • 各种仪器按下表依次加入试剂，充分混匀，37℃水浴中孵育5min。
    
    • 酶标仪、全自动生化分析仪TC测定
      

      加入物(μL)	空白孔	标准孔	待测孔
      ddH2O	3	-	-
      TC标准(5mmol/L)	-	3	-
      待测样本	-	-	3
      COD-PAP工作液	300	300	300

    • 分光光度计(1mL比色杯)、半自动生化分析仪TC测定
      

      加入物(mL)	空白管	标准管	待测管
      ddH2O	0.01	-	-
      TC标准(5mmol/L)	-	0.01	-
      待测样本	-	-	0.01
      COD-PAP工作液	1	1	1

    • 普通分光光度计(2mL比色杯)TC测定
      

      加入物(mL)	空白管	标准管	待测管
      ddH2O	0.02	-	-
      TC标准(5mmol/L)	-	0.02	-
      待测样本	-	-	0.02
      COD-PAP工作液	2	2	2

  • 立即用相应仪器测定500～520nm吸光度，以空白孔(管)调零，读取标准孔(管)、测定孔(管)的吸光度，分别记为A _标准、A _测定。
    机器参数：
    

    主波长/次波长	500/600nm
    反应类型	终点法
    反应方向	升反应(+)

• 血清、血浆等液体样本(空白调零)：
  FC(mmol/L)＝A_测定/A_标准×5
  
• 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：
  FC(mmol/L)=(A_测定－A_空白)/(A_标准－A_空白)×5
  
• 组织样本(空白调零)：
  FC(mmol/g)＝A_测定/A_标准×5×V₂/(m×1000)
  
• 组织样本(全自动生化分析仪)：
  FC(mmol/g)＝(A_测定－A_空白)/(A_标准－A_空白)×5×V/(m×1000)
  
• 细胞样本(空白调零)：
  FC(mmol/L)＝A_测定/A_标准×5×V₂/V₁
  
• 细胞样本(全自动生化分析仪)：
  FC(mmol/L)＝(A_测定－A_空白)/(A_标准－A_空白)×5×V₂/V₁
  m＝组织样本取样量(g)
  V₁＝细胞样本取样量(mL)
  V₂＝样本匀浆液总体积(mL)